激光光學(xué)顯微鏡的組成、使用領(lǐng)域及優(yōu)點(diǎn)說(shuō)明

激光光學(xué)顯微鏡主要組成：

（1）物鏡物鏡是決定顯微鏡性能的最重要部件，安裝在物鏡轉(zhuǎn)換器上，接近被觀察的物體，故叫做物鏡或接物鏡。物鏡的放大倍數(shù)與其長(zhǎng)度成正比。物鏡放大倍數(shù)越大，物鏡越長(zhǎng)。

（2）目鏡因?yàn)樗拷^察者的眼睛，因此也叫接目鏡。安裝在鏡筒的上端。

（3）聚光器：聚光器也叫集光器。位于標(biāo)本下方的聚光器支架上。它主要由聚光鏡和可變光闌組成。其中，聚光鏡可分為明視場(chǎng)聚光鏡（普通顯微鏡配置）和暗視場(chǎng)聚光鏡。

（4）反光鏡：反光鏡是一個(gè)可以隨意轉(zhuǎn)動(dòng)的雙面鏡，直徑為50mm，一面為平面，一面為凹面，其作用是將從任何方向射來(lái)的光線經(jīng)通光孔反射上來(lái)。平面鏡反射光線的能力較弱，是在光線較強(qiáng)時(shí)使用，凹面鏡反射光線的能力較強(qiáng)，是在光線較弱時(shí)使用。

（5）照明光源：顯微鏡的照明可以用天然光源或人工光源

（6）濾光器：安裝在光源和聚光器之間。作用是讓所選擇的某一波段的光線通過(guò)，而吸收掉其他的光線，即為了改變光線的光譜成分或削弱光的強(qiáng)度。分為兩大類：濾光片和液體濾光器。

（7）蓋玻片和載玻片：蓋玻片和載玻片的表面應(yīng)相當(dāng)平坦，無(wú)氣泡，無(wú)劃痕。最好選用無(wú)色，透明度好的，使用前應(yīng)洗凈。蓋玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度是0.17±0.02mm，如不用蓋玻片或蓋玻片厚度不合適，都會(huì)影響成像質(zhì)量。載玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度是1.1±0.04mm，一般可用范圍是1—1.2mm，若太厚會(huì)影響聚光器效能，太薄則容易破裂。

激光顯微鏡的使用領(lǐng)域

（1）共聚焦及雙光子在現(xiàn)代生物學(xué)研究中有如下應(yīng)用：

（2）多色熒光成像(Multi-color imaging)，具有多磁道和雙向掃描，曲線掃描等特性。

（3）三維重構(gòu)（Three dimentional reconstruction）及定量分析。

（4）實(shí)時(shí)成像（Time series,real time imaging），可進(jìn)行活細(xì)胞跟蹤。

（5）離子成像（Ion imaging）/比率成像（Ratio imaging），可進(jìn)行Ca2+,Mg2+,H+,Na+,K+,Zn2+,Ni2+,Fe2+,Hg2+,Pb2+及Cd2+等成像。

（6）熒光原位雜交（FISH:fluorescence in situ hybridization）；

（7）熒光漂白恢復(fù)（FRAP：fluorescence recovery after photobleaching）；

（8）熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRETM:fluorescence resonance energy transfer；

（9）光生命期成像顯微術(shù)（FLIM:fluorescence lifetime imaging microscopy）。

（10）熒光相關(guān)光譜（FCS:fluorescence correlation spectroscopy）。

激光顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)

（1）熒光標(biāo)記的特異性及可定量性。

（2）共聚焦針孔的運(yùn)用，有效的消除了焦平面上下散射光，提高軸向分辨率。

（3）點(diǎn)光源激光的應(yīng)用，對(duì)熒光素能達(dá)到有效的激發(fā)，激發(fā)的特異性高，降低對(duì)熒光的淬滅，增強(qiáng)側(cè)向分辨率。

（4）雙光子的應(yīng)用，相對(duì)較低平均功率的紅外激發(fā)，大大減低對(duì)活細(xì)胞的損傷；熒光激發(fā)高度聚焦在焦點(diǎn)處，可避免了焦點(diǎn)以外的光漂白（Photobleaching）和光毒（cytotoxicity）作用，延長(zhǎng)觀察時(shí)間，是目前用于活細(xì)胞跟蹤的最理想方法。

（5）脈沖激光散射和吸收程度小，透射性強(qiáng)，對(duì)厚樣品的穿透可達(dá)400um，是對(duì)厚的組織分析的最首先方法。

（6）結(jié)合META新技術(shù)，尤其對(duì)熒光蛋白成像具有更方便，更精確的效果。